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斑马鱼体脂含量测定(氯仿-甲醇法)
2023-08-02 10:13  浏览:864  搜索引擎搜索“广企汇”
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1.冷冻干燥:将成年斑马鱼麻醉(饥饿12h,排清粪便),放入1.5 mL或2 mL EP管中,液氮速冻后在-80 ℃冷冻 24 h,使用冻干机(Alpha 2-4 LSC)冷冻干燥处理24h;称量斑马鱼干重(DW)
2.萃取:将冷冻干燥后的鱼剪碎放入玻璃管1中,加入5mL氯仿甲醇混合液(2:1, vol/vol),静置萃取≥2h。
3.准备一组新的干净玻璃管2,称量玻璃管2重量(W1)w(glass2)】。

  1. 3000rpm,离心10min【若玻璃管质量差可降低转速至2000rpm,个别玻璃管在离心过程中容易碎】,吸取上清(大约4 mL)转移至step 3称重的玻璃管2中,再次在剩余残渣加入2 mL氯仿甲醇混合液,离心取上清(大约1 mL)转移至step 3称重的玻璃管2中 (注意不要吸到渣子)。
    5.加氯化钙:在step 4中的玻璃管2中加入1.2 mL 1.6%的氯化钙溶液,涡旋混匀,静置1h,吸弃上清水相(保留1-2mm),将下层有机相放置65-70℃烘干@至恒重(W2)【此时,玻璃管2剩余物质即为lipid,W2=w(glass2) + w(Lipid)】。

体脂含量(%)=[(W2-W1)/DW] × 100
体脂含量(%)=[w(galss2) + w(Lipid)- w(glass2) /DW] × 100
体脂含量(%)=[w(Lipid)/DW] × 100

Note: @ 烘箱烘干或者先通风橱中氮吹再烘干[减少氯仿甲醇危害]

发布人:616f****    IP:125.64.63.***     举报/删稿
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